二氧化碳搖床的操作指導

二氧化碳搖床（CO?搖床）是一種結合恒溫搖床和CO?氣體控制的培養(yǎng)設備，主要用于細胞培養(yǎng)、微生物發(fā)酵等需要精確控制溫度、濕度和氣體環(huán)境的實驗。以下是一個詳細的應用方案，涵蓋設備選擇、操作流程、應用場景及注意事項：

一、設備選擇與配置
1. 基礎功能要求
  溫度控制：范圍通常為室溫+5℃至50℃，精度±0.1℃。
  CO?控制：濃度范圍0 20%，精度±0.1%，需配備紅外或熱導傳感器。
  濕度控制：可選配濕度模塊（維持>90% RH，防止培養(yǎng)液蒸發(fā)）。
  振蕩功能：轉速范圍50 300 rpm，可調振幅（通常3 50mm），支持圓周或線性振蕩。
  滅菌方式：內(nèi)腔需耐腐蝕（不銹鋼材質），支持高溫濕熱滅菌（如121℃）或紫外線消毒。
2. 推薦品牌與型號
  Thermo Scientific（如Forma Series）
  Eppendorf（New Brunswick S41i）
  Binder（CB系列）

二、典型應用場景
1. 哺乳動物細胞培養(yǎng)
  應用：懸浮細胞（如CHO、HEK293）或貼壁細胞（需專用培養(yǎng)瓶）。
  參數(shù)：37℃、5% CO?、80 120 rpm，維持pH穩(wěn)定（依賴CO?/HCO??緩沖體系）。
2. 微生物發(fā)酵與蛋白表達
  應用：大腸桿菌、酵母等重組蛋白表達，需優(yōu)化溶氧（通過轉速調節(jié)）。
  參數(shù)：30 37℃、0 5% CO?（根據(jù)菌種需求）、150 250 rpm。
3. 3D細胞培養(yǎng)與類器官研究
  應用：腫瘤球體、腸道類器官培養(yǎng)，需低轉速（50 80 rpm）減少剪切力。
4. 缺氧/低氧條件模擬
  擴展功能：搭配O?控制器（如1% O?、5% CO?、94% N?），研究腫瘤微環(huán)境。


三、操作流程（以細胞培養(yǎng)為例）
1. 前期準備
  消毒：用70%乙醇擦拭內(nèi)腔，或運行高溫滅菌程序。
  校準：定期校準CO?傳感器（使用標準氣體）。
2. 參數(shù)設置
  設定溫度（如37℃）、CO?濃度（5%）、轉速（100 rpm）。
  預熱至穩(wěn)定狀態(tài)（約30分鐘）。
3. 樣品放置
  使用透氣蓋培養(yǎng)瓶或密封瓶（需平衡CO?滲透率）。
  液體體積不超過容器1/3，避免濺出。
4. 運行監(jiān)控
  實時監(jiān)測溫度、CO?波動，記錄日志。
  定期檢查培養(yǎng)液pH（應為7.2 7.4）。
5. 結束處理
  關閉CO?氣源，待濃度降至0%后再開門，防止CO?驟降導致培養(yǎng)液pH飆升。

四、注意事項
1. 安全與維護
  氣瓶壓力需穩(wěn)定（建議使用雙氣瓶自動切換系統(tǒng)）。
  防止污染：定期更換HEPA過濾器（如有），避免冷凝水積聚。
2. 常見問題解決
  CO?波動大：檢查氣密性、傳感器是否失效。
  轉速不穩(wěn)定：檢查電機或皮帶磨損。
3. 特殊需求適配
  高濕度需求：放置水盤或使用濕度控制模塊。
  無氧環(huán)境：需定制氮氣置換功能。


五、擴展應用案例
  疫苗開發(fā)：用于病毒載體擴增（如腺病毒），優(yōu)化細胞密度與感染效率。
  腸道微生物研究：模擬腸道厭氧環(huán)境，培養(yǎng)厭氧菌群。

通過合理配置參數(shù)和嚴格操作，二氧化碳搖床可顯著提高細胞或微生物的培養(yǎng)效率，尤其適用于需要動態(tài)混合與氣體控制的研究場景。根據(jù)實驗需求選擇功能模塊（如光照、多參數(shù)監(jiān)測）可進一步擴展其應用范圍。